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Le test ELISA

En classe, il est impossible de travailler sur des antigènes du virus du SIDA. Aussi on utilise des antigènes sans danger afin de montrer comment se fait le dépistage du SIDA. On utilise ici deux anticorps contre la bêta lactoglobuline bovine. L'un des anticorps est fixé au fond de chaque puits. Lorsque l'antigène est présent, il se fixe sur cet anticorps.

Barette de huit puits

Première expérience

Dans chaque puit, on verse :

100 µL de solution à tester ou de solution étalon à l'aide d'une micropipette;
100 µL d'anticorps traceur;
Laisser réagir 30 min à la température ambiante. Les antigènes (lactoglobulines) se fixent alors sur les anticorps fixés au fond des puits. Les anticorps traceurs se fixent sur les antigènes. Ils sont associés à une enzyme : l'acétylcholinestérase (AchE);
Laver à l'eau pure les plaques pour éliminer l'excédent d'anticorps traceurs qui ne s'est pas fixé sur les antigènes;
Ajouter dans chaque puits le réactif d'Elmann qui contient les réactifs permettant de mesurer l'activité enzymatique de l'AchE. Laisser agir. La réaction enzymatique conduit à l'apparition d'une coloration jaune dont l'intensité est proportionnelle à la quantitée d'enzyme fixée sur les anticorps. Ces anticoprs sont eux-mêmes fixés sur les antigènes qui sont piégés par les anticorps fixés au fond des puits;
Lire les résultats à l'œil nu ou à l'aide d'un colorimètre réglé sur 420 nm.

Pour suivre et conserver une trace de l'expérience, il est possible de disposer les barettes sur un scanner soit en position debout, soit en position couchée, comme le montrent les images ci-dessous.

100 µL de solution de fromage de chèvre
(qq mm³)

100 µL de solution de fromage de vache (qq mm3)

100 µL de solution de lait de vache à 100µL/L

100 µL de solution étalon

100 µL d'eau

Résultats au bout de 3 minutes

Résultats au bout de 6 minutes

Résultats au bout de 10 minutes

Deuxième expérience

Dans les trois séries de puits, nous avons disposé :

140µL eau 100µL traceur	120µL eau 20µL étalon 100µL traceur	100µL eau 40µL étalon 100µL traceur	80µL eau 60µL étalon 100µL traceur	60µL eau 80µL étalon 100µL traceur	40µL eau 100µL étalon 100µL traceur	20µL eau 120µL étalon 100µL traceur	140µL étalon 100µL traceur
100µL eau 100µL traceur	100µL eau 100µL traceur	100µL sol lait de vache 100µL/L 100µL traceur	100µL sol lait de vache 100µL/L 100µL traceur	100µL sol fromage de vache 100µL/L 100µL traceur	100µL sol fromage de vache 100µL traceur	100µL sol fromage de chèvre 100µL traceur	100µL sol fromage de chèvre 100µL traceur
100µL sol lait de vache 0µL/L 100µL eau 100µL traceur	100µL sol lait de vache 40µL/L 100µL eau 100µL traceur	100µL sol lait de vache 80µL/L 100µL eau 100µL traceur	100µL sol lait de vache 120µL/L 100µL eau 100µL traceur	100µL sol lait de vache 160µL/L 100µL eau 100µL traceur	100µL eau 100µL traceur	140µL étalon 100µL traceur	140µL étalon 100µL traceur

Résultats scannés en disposant les barettes couchées sur le scanner