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Le test ELISA



En classe, il est impossible de travailler sur des antigènes du virus du SIDA. Aussi on utilise des antigènes sans danger afin de montrer comment se fait le dépistage du SIDA. On utilise ici deux anticorps contre la bêta lactoglobuline bovine. L'un des anticorps est fixé au fond de chaque puits. Lorsque l'antigène est présent, il se fixe sur cet anticorps.

Barette de huit puits


Première expérience

Dans chaque puit, on verse :

100 µL de solution à tester ou de solution étalon à l'aide d'une micropipette;
100 µL d'anticorps traceur;
Laisser réagir 30 min à la température ambiante. Les antigènes (lactoglobulines) se fixent alors sur les anticorps fixés au fond des puits. Les anticorps traceurs se fixent sur les antigènes. Ils sont associés à une enzyme : l'acétylcholinestérase (AchE);
Laver à l'eau pure les plaques pour éliminer l'excédent d'anticorps traceurs qui ne s'est pas fixé sur les antigènes;
Ajouter dans chaque puits le réactif d'Elmann qui contient les réactifs permettant de mesurer l'activité enzymatique de l'AchE. Laisser agir. La réaction enzymatique conduit à l'apparition d'une coloration jaune dont l'intensité est proportionnelle à la quantitée d'enzyme fixée sur les anticorps. Ces anticoprs sont eux-mêmes fixés sur les antigènes qui sont piégés par les anticorps fixés au fond des puits;
Lire les résultats à l'œil nu ou à l'aide d'un colorimètre réglé sur 420 nm.


Pour suivre et conserver une trace de l'expérience, il est possible de disposer les barettes sur un scanner soit en position debout, soit en position couchée, comme le montrent les images ci-dessous.

100 µL de solution de fromage de chèvre
(qq mm³)

100 µL de solution de fromage de vache (qq mm3)

100 µL de solution de lait de vache à 100µL/L

100 µL de solution de lait de vache à 100µL/L

100 µL de solution étalon

100 µL de solution étalon

100 µL d'eau

100 µL d'eau

Résultats au bout de 3 minutes


Résultats au bout de 6 minutes


Résultats au bout de 10 minutes


Deuxième expérience

Dans les trois séries de puits, nous avons disposé :

140µL eau



100µL traceur

120µL eau

20µL étalon

100µL traceur

100µL eau

40µL étalon

100µL traceur

80µL eau

60µL étalon

100µL traceur

60µL eau

80µL étalon

100µL traceur

40µL eau

100µL étalon

100µL traceur

20µL eau

120µL étalon

100µL traceur

140µL étalon

100µL traceur

100µL eau

100µL traceur

100µL eau

100µL traceur

100µL sol lait de vache 100µL/L

100µL traceur

100µL sol lait de vache 100µL/L

100µL traceur

100µL sol fromage de vache 100µL/L

100µL traceur

100µL sol fromage de vache

100µL traceur

100µL sol fromage de chèvre

100µL traceur

100µL sol fromage de chèvre

100µL traceur

100µL sol lait de vache 0µL/L

100µL eau

100µL traceur

100µL sol lait de vache 40µL/L

100µL eau

100µL traceur

100µL sol lait de vache 80µL/L

100µL eau

100µL traceur

100µL sol lait de vache 120µL/L

100µL eau

100µL traceur

100µL sol lait de vache 160µL/L

100µL eau

100µL traceur

100µL eau

100µL traceur

140µL étalon

100µL traceur

140µL étalon

100µL traceur

Résultats scannés en disposant les barettes couchées sur le scanner



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